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通過連續(xù)微流控電穿孔芯片擴大 CRISPR/Cas9 基因編輯的細胞數(shù)量

CRISPR/Cas9 介導的基因編輯為多種疾病提供了有前途且安全的治療選擇。在短時間內有效獲取大量基因編輯治療細胞的技術難題阻礙了 CRISPR/Cas9 介導的基因編輯的廣泛臨床應用。在此,已經開發(fā)了一種大容量連續(xù)電穿孔芯片 (LaViE-Chip) 來應對獲取足夠數(shù)量的基因編輯細胞用于 CRISPR/Cas9 基因編輯的挑戰(zhàn)。通過并聯(lián)多個相對較窄的微流體通道,兩個簡單的片外電極在細胞流體積和電場均勻性之間實現(xiàn)了令人滿意的平衡,這也將電極周圍的有害影響與目標細胞隔離開來。同時,通過精心設計微流控通道的曲率,實現(xiàn)了靶細胞的流體動力學控制旋轉,從而提高了轉染效率和細胞活力。通過這些改進,LaViE-Chip 實現(xiàn)了 71.06% 的電轉染效率、84.3% 的細胞活力和 107cell/min 細胞處理速度。此外,首次通過電穿孔成功連續(xù)編輯 CRISPR 基因,為治療性 CRISPR 基因編輯奠定了技術基礎。


 

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